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Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書
點擊次數:1603 更新時間:2020-06-19

Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

 

Super-BradfordProteinAssayKit                                                       

Super-Bradford 蛋白定量試劑盒說明書

 



Cat.No. K0013                         

 

保存:2-8℃

 

組分說明



 

Catalogno.                                 K0013

KitSize                                800 次/微孔,100 次/試管

BradfordProteinAssayReagent               200ml

BSA 標準液(2mg/ml)                          2ml

 



 

產品簡介

 

    Bradford 法是簡dan和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合后,產生藍色化合物,反應迅速而穩定。反應化合物在 465-595nm 處有大的光吸收值,化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系,因此可通過檢測 595nm 的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。本產品將傳統的 Bradford 方法進行了改良,大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍染色法,靈敏度范圍為 100-1,500 μg/ml。使用本產品反應迅速,顏色產物 1 小時內保持穩定。本試劑盒適用于多種緩沖液系統,不受金屬離子、還原劑和螯合劑的干擾。

 

注意事項 

 

 1.  如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表 1),可采用 BCA 蛋白定量試劑盒(K0014)或其他蛋白定量產品。

 

 2.  BSA 標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水進行稀釋)。

 

 3.  本試劑盒不適合含有去污劑的蛋白定量,所測蛋白分子量必須大于 3kD。

 

 4.  操作中請佩戴手套。

 

 5.  本產品僅限科研使用。

 



操作步驟(以大腸桿菌表達系統為例)

 

 1.  稀釋 BSA 標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標準品。

 

 

                                                

管號    稀釋液用量(μl)   BSA標準品用量(μl)    BSA標準品終濃度(μg/ml)

                                                 

 

A                 0                 100                2,000

B                50                 150                1,500

 

C                200                200                1,000

 

D                200         200(從C管中取)          500

E                200         200(從D管中取)          250

 

F                200         200(從E管中取)           125

G                200                 0                 0(空白)

 

 

 2.  試管檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

 

    1)按上表稀釋標準品,將 30 μl 稀釋好的 BSA 標準品分別加到作好標記的試管中。 

    2)取干凈的試管,分別加入 30 μl 待測蛋白樣品(原液或稀釋液),并作好標記,推薦每個測定做 2-3 個平行反應。

 

    3)向步驟 1)和步驟 2)的試管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,室溫放置 10 分鐘。

 

    4)用分光光度計測定 595nm 處的吸光值。

 

    5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

 

        注意:數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

 

    6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。

 

 3.  微孔檢測(檢測范圍:100-1500 μg/ml)

 

    1)將按表 1 稀釋好的 A-GBSA 標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各 5 μl 分別加到作好標記的 96 孔板微孔中。 

 

    2)每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent,充分混勻,蓋上 96 孔板蓋,室溫放置 10 分鐘。

 

    4)用酶標儀測定 595nm 處的吸光值。

 

    5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

 

        注意:數據處理時需要去除明顯錯誤的值。未知樣品濃度可以從標準曲線中查得, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數。如果是計算機繪制得曲線,可以從計算機給出的線性方程式計算出未知樣品的濃度。

 

    6)如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。

 

  

 附表

                                               附表 1. 干擾物質表

                                                         

化合物             耐受濃度              化合物             耐受濃度

 

         緩沖液                            去垢劑和變性劑

 

乙酸鹽               0.6M            Brij35            干擾

甘氨酸               0.1M          脫氧膽酸納              0.25%

 

HEPES             0.1M            CHAPS              1%

 

MES              0.7M            NP-40             干擾

 

MOPS              0.2M            辛葡糖                2%

 

Na + -檸檬酸               50mM              SDS              0.1%

      

PIPES          500mM           Tween-20            干擾

 

磷酸鈉/磷酸鈉                1M          TritonX-100         0.1%

 

乙酸鈉               0.6M                      糖類

 

Tris             2M              蔗糖               1mM

 

鹽類                                螯合劑

 

硫酸銨                1M              EDTA           100mM

NaCl              1M              EGTA            50mM

 

尿素                6M                         

 

極性化合物                                 其他

 

甘油               99%               HCl             0.1M

 

還原劑                       NaOH              0.1M

 

β-巰基乙醇               1M              NAD              1mM

DTT               1M               苯                5%





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