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乳酸(LA)含量檢測試劑盒操作步驟
點擊次數:2471 更新時間:2020-12-16

乳酸(LA)含量檢測試劑盒說明書

 

微量法

 

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

 

規格:100T/48S

 

產品內容:

 

提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;

 

試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;

 

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加入0.6ml試劑一充分溶解。可分裝后-20℃保存, 避免反復凍融;

 

試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加入6mL試劑一充分溶解;可分裝后-20℃保存,避免反復凍融;

 

試劑四:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。 臨用前每瓶加入6mL 試劑一混勻,可分裝后-20℃保存,避免反復凍融;

 

試劑五:液體3mL×1瓶,4℃保存。

 

標準品:粉劑×1支,4℃保存。臨用前加入1.04mL提取液配成100µmol/mL 的標準溶液;

 

顯色液的配制:臨用前根據用量按照試劑三(V):試劑四(V):試劑五(V)=1:1:0.5的比例充分混勻,現配現用;

 

產品說明:

 

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關,乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADH和H+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原特異性底物, 在450nm處有特征吸收峰。

 

自備實驗用品及儀器:

 

天平、研缽/勻漿器、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、乙醇和蒸餾水。

 

操作步驟:

 

一、樣本處理:

 

a.組織:按照質量(g):提取液一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min后取上清待測。

 

b.細胞:按照細胞數量(106個):提取液一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃, 12000g離心10min后取上清待測。

 

c.血清(漿):取100µL血清(漿)加入0.9mL提取液,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

 

二、測定操作

 

1、分光光度計/酶標儀預熱30min,波長調至450nm,分光光度計用蒸餾水調零。

 

2、標準液的稀釋:將100µmol/mL 的標準溶液用蒸餾水稀釋為10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0µmol/mL的標準溶液待測。

 

3、加樣表:

 

測定管 對照管 標準管 空白管

 

樣品(µL) 10 10 - -

 

標準品(µL) - - 10 -

 

蒸餾水(µL) - 10 - 10

 

試劑一(µL) 40 40 40 40

 

試劑二(µL) 10 - 10 10

 

工作液(µL) 140 140 140 140

 

于 37℃準確反應 30min。于 450nm 處測定吸光值,分別記為 A 測定管,A 對照管,A 標準管,A 空白管,計算?A 測定=A 測定管-A 對照管;?A 標準= A 標準管-A 空白管。

 

三、乳酸含量的計算:

 

1、標準曲線的繪制

 

以各標準溶液濃度為x軸,以其對應的吸光值(?A標準)為y軸,繪制標準曲線,得到標準方程

 

y=kx+b,將?A測定帶入公式中得到x(µmol/mL)。2、乳酸含量計算

 

(1)按照蛋白含量計算

 

LA含量(µmol/mg prot)=x×V 樣÷V 樣÷Cpr =x÷Cpr

 

(2)按照樣本質量計算

 

LA含量(µmol/g 鮮重)=x×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)=x ÷W。

 

(3)按照細胞數量計算

 

LA含量(µmol/106 cell)=x×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)=x ÷細胞數量

 

(4)按照液體體積計算

 

LA含量(µmol/mL)= 10×x。

 

V樣品:加入的樣品體積,0.01mL。:W:樣本質量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL, 蛋白濃度需自行測定; V提取液:加入的提取液體積,1mL;細胞數量,5×106個;V液體:液體樣本體積,0.1mL。

 

注意事項:

 

1. 若測定吸光值?A大于大濃度標準品OD值,請將樣品體積進行適當的稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。

 

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯免疫(ELISA)技術服務

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術服務

 

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

免疫細胞化學ICC實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務

PKC活性檢測實驗

非標定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務

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