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己烯雌酚(DES)ELISA檢測試劑盒使用說明書

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詳細(xì)介紹

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

己烯雌酚(DES)ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包己烯雌酚(DES抗原包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的競爭抗原,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的己烯雌酚(DES)負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.酶標(biāo)儀(450nm)

2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

競爭抗原-HRP

6mL

3mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、0.751.53612 ng/ml

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的競爭抗原50μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

1. 15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;

2. 百分結(jié)合率計算:設(shè)S0管計數(shù)為B0,各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計數(shù)為B,非特異管計數(shù)為NSB,則百分結(jié)合率計算公式如下:B/B0=(B-NSB)/(B0-NSB)×100%

3. logit計算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1-B/B0)

4. 將標(biāo)準(zhǔn)品的OD均值與標(biāo)準(zhǔn)品0點(diǎn)的OD均相除,為標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的百分結(jié)合率,在log-logit坐標(biāo)紙上繪圖。

5. Log-logit雙對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線:坐標(biāo)紙上橫軸從左至右第一個1-9表示為第一個10進(jìn)位,第二個1-9表示為第二個10進(jìn)位。第三個1-9表示為第三個10進(jìn)位。坐標(biāo)紙縱軸為百分比(1-99),即各標(biāo)準(zhǔn)吸光值的百分結(jié)合率。取一條通過各點(diǎn)的直線。要求盡可能多的點(diǎn)在線上,同時剩余的點(diǎn)均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結(jié)合率,再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點(diǎn),此點(diǎn)對應(yīng)的橫坐標(biāo)濃度即為樣品的濃度,無須換算。

6. 人工處理:以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo),對應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),對應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線(理想化時是一條直線)。根據(jù)待測樣

品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標(biāo)紙,查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是最后的濃度值。

7. 自動處理:使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式,由電腦自動計算得出結(jié)果。

8. 敏感度:1.0 ng/ml

9. 圖例

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試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:最DI檢測濃度小于0.1 ng/ml

3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6個月

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗技術(shù)服務(wù):




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